大鼠滑膜細(xì)胞分離自滑膜組織。滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu)，各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會(huì)累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，同時(shí)在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。
滑膜細(xì)胞是構(gòu)成滑膜層的細(xì)胞群體，是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中，基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布。
目前已經(jīng)建立的大鼠滑膜細(xì)胞分離培養(yǎng)方法多以酶消化法為主，分離得到的細(xì)胞純度不高，并且培養(yǎng)時(shí)間較長。下面小編就分享滑膜細(xì)胞的提取方法。
1、大鼠經(jīng)麻醉，腹主動(dòng)脈取血處死后，用酒精對膝關(guān)節(jié)進(jìn)行局部消毒，于膝關(guān)節(jié)正中縱行切開皮膚，分離肌肉，露出膝蓋骨，繼續(xù)向下分離，可見平滑光亮的滑膜組織，用手術(shù)剪分離關(guān)節(jié)囊的滑膜層和纖維層，然后取出滑膜，同法采集另一個(gè)膝關(guān)節(jié)滑膜。
2、將滑膜放入裝有PBS的EP管中，上下顛倒清洗，棄去PBS，重復(fù)兩次。
3、在EP管中用手術(shù)剪將滑膜盡量剪碎，用胰酶消化15~20min，加入2倍量的無血清培養(yǎng)基終止消化，去除培養(yǎng)基，再加入2倍量的培養(yǎng)基，將胰酶*除去。
4、把滑膜移到25mLflask中，盡量使滑膜平鋪在瓶底，避免因重疊而貼壁不牢，易被培養(yǎng)基沖起，將flask直立放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育3h。
5、取出flask，加入*培養(yǎng)基后，將flask平放于細(xì)胞培養(yǎng)箱中。
6、隔日觀察組織貼壁情況。若有輕微污染，更換培養(yǎng)基，觀察。
更新時(shí)間：2022-07-20
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